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Deshidrogenasa Succínica del Hígado

Objetivos:

  • Detectar la actividad enzimática de la deshidrogenasa succínica del hígado utilizando indicadores redox como aceptores artificiales de electrones.

  • Establecer qué sustancias pueden actuar como inhibidores de la deshidrogenasa succínica.


Marco Teórico:

La deshidrogenasa succínica es una enzima especial de la mitocondria, porque participa en dos procesos metabólicos  a la vez, el ciclo de Krebs y la cadena de transporte electrónico. En el ciclo de Krebs, la enzima convierte en fumarato en presencia de FAD como coenzima.

El 2,6-diclorofenolindofenol y el azul de metileno resultan ser indicadores redox apropiados para funcionar en los homogenizados de tejidos.

Se trata de sustancias de color azul en su forma oxidada, que al aparecer átomos de hidrógenos del sustrato originan la forma leuco, la cual es incolora. Con este cambio del indicador redox se comprueba que la enzima está transformando el sustrato.

Materiales y Reactivos:

Materiales

  • Tubos de Ensayo: Consiste en un pequeño tubo de vidrio con una punta abierta (que puede poseer una tapa) y la otra cerrada y redondeada, que se utiliza en los laboratorios para contener pequeñas muestras líquidas, realizar reacciones en pequeña escala, entre otras cosas.
     
  • Gotero: es un tubo hueco terminado en su parte inferior en forma cónica y cerrado por la parte superior por una perilla o dedal de goma. Se utiliza para trasvasar pequeñas cantidades de líquido vertiéndolo gota a gota.
  • Probeta: Este material permite medir volúmenes de líquidos, las hay de vidrio, plástico y de diferentes capacidades.
  • Gradilla: es utilizada para sostener y almacenar gran cantidad de tubos de ensayo, de todos los diámetros y formas.
  • Licuadora: un electrodoméstico con un motor eléctrico que hace girar unas cuchillas que muelen los alimentos.
  • Cuchillo: Sirve para cortar materiales u objetos.
  • Vaso Químico: Material de laboratorio de vidrio, que se utiliza como recipiente y también para obtener precipitados.
     
  • Balanza: es un tipo de balanza utilizada para determinar o pesar la masa de objetos.
     
  • Plancha de Calentamiento: esta diseñado para calentar muestras a temperaturas hasta 350º ideal para suplir las necesidades de calentamiento.
     

Reactivos:
  • Solución amortiguadora de fosfato monobásico de sodio 0.1 M de pH = 7.4: Irritación y enrojecimiento de la piel por un contacto prolongado. Irritación y ardor en los ojos.


  • Solución de 2,6 diclorofenolindofenol al 0.02 % en agua:Sustancia no peligrosa.


  • Solución de azul de metileno al 0.02 % acuoso: Nocivo en caso de ingestión.


  • Solución de malonato de sodio 0.1 M: No se descartan otras características peligrosas. Observar las precauciones habituales en el manejo de productos químicos.


  • Solución de succinato de sodio 0.2 M: Tóxico y Reactivo. Irritante y Combustible.


  • Solución de cianuro de sodio 0.1 M: El polvo o neblina (solución)puede ser irritante a las vías respiratorias y garganta. En NaCN reacciona con la humedad liberando gas cianhídrico.El cianuro en forma de polvo o como gas de cianhídrico, es rápidamente absorbido por los ojos y puede ser las vía de severas irritaciones e intoxicación. Debido al contenido de hidróxido de sodio puede causar daños a los tejidos severos y dolorosos.
    Es un tóxico por absorción de la piel. El contacto prolongado o repetido puede causar escozor, caracterizado por erupciones musculares, papilares y vesiculares. A través de la piel se puede absorber cantidades fatales de cianuro de sodio El cianuro inhibe la oxidación tisular provocando la muerte por asfixia química en minutos.
    No figura como cancerígeno.
  • Acetona: Es irritante y corrosiva, peligrosa en grandes concentraciones y sus gases son tóxicos y combustible.


  • Hígado fresco
    Procedimiento:




    Rect
    Solución
    Tubos


    1
    2
    3
    4
    5
    6
    A
    ml de amortiguador
    0.5
    0.5
    0.5
    0.5
    0.5
    0.5
    B
    ml de sustrato
    0.0
    0.5
    0.5
    0.5
    0.5
    0.5
    C
    Ml de agua destilada
    1.0
    0.5
    0.5
    0.0
    0.0
    0.0
    D
    Ml de homogenizado
    1.0
    1.0
    1.0
    1.0
    1.0
    1.0
    E
    Ml de indicador DICPIP O Azul de metileno
    1.0
    1.0
    1.0
    1.0
    1.0
    1.0
    F
    Ml de malonato de sodio
    -
    -
    -
    0.5
    -
    -
    G
    Ml de azida de sodio
    -
    -
    -
    -
    0.5
    -
    H
    Ml de cianuro de sodio
    -
    -
    -
    -
    -
    0.5






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