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Punto Isoeléctrico de Aminoácidos y Proteínas


Resumen:
En este laboratorio se procede a titular un aminoácido con NaOH, y a medida que se le añade la base se mide el pH con un peachímetro hasta encontrar la carga neta de dicho aminoácido. para la prueba con la caseína se busca llegar a neutralizarla, es decir buscar su carga neta, que es cuando precipite la caseína en la leche, al añadirle el ácido correspondiente.
Objetivos:

· Determinar los pKa de un aminoácido polar con carga y un aminoácido no polar, mediante titulación con álcali.

· Estimar el punto isoeléctrico de los aminoácidos polares y no polares.

· Determinar el punto isoeléctrico de una proteína mediante la técnica de precipitación.


Marco Teórico


El punto isoeléctrico se define como el pH en el cual el número de cargas positivas se iguala al número de cargas negativas que aportan los grupos ionizables de una molécula. En el punto isoeléctrico la carga neta de la molécula es cero (0). En los aminoácidos los grupos ionizables corresponden a grupos carboxilos, amino, fenólicos y tiólicos.

Los puntos isoeléctricos proporcionan información útil para razonar sobre el comportamiento de los aminoácidos y proteínas en solución. Así, la presencia de grupos ionizables en estas moléculas tiene importantes consecuencias sobre la solubilidad.
Los aminoácidos y las proteínas son menos solubles en su punto isoeléctrico si las demás condiciones permanecen iguales. Esto se debe a que los iones dipolares no presentan carga neta y cristali­zan en forma de sales insolubles a ese pH.


Materiales y Reactivos

Materiales:

· Buretas: son tubos cortos, graduados, de diámetro interno uniforme, provistas de un grifo de cierre o llave de paso en su parte inferior. Se usan para ver cantidades variables de líquidos, y por ello están graduadas con pequeñas subdivisiones (dependiendo del volumen, de décimas de mililitro o menos). Su uso principal se da en volumetrías, debido a la necesidad de medir con precisión volúmenes de líquido variables.


· Soportes: es una pieza del equipamiento de laboratorio donde se sujetan las pinzas de laboratorio, mediante dobles nueces. Sirve para sujetar tubos de ensayo, buretas, embudos de filtración, embudos de decantación, etc. También se emplea para montar aparatos de destilación y otros equipos similares más complejos.


· Pinzas de bureta: Se utilizan para sujetar dos buretas a la vez. Son muy útiles cuando se realizan titulaciones.


· Matraz Erlenmeyer: Es un utensilio de vidrio que se emplea para contener sustancias los hay de varias capacidades.

· Pipetas: no están graduadas y sólo permiten medir un volumen único.

· Potenciómetro de pH: un instrumento que mide la diferencia de potencial entre dos electrodos: un electrodo de referencia (generalmente de plata/cloruro de plata) y un electrodo de vidrio que es sensible al ión de hidrógeno.


Reactivos:

  • Ácido glutámico: es uno de los 20 aminoácidos que forman parte de las proteínas. El ácido glutámico es crítico para la función celular y no es nutriente esencial porque en el hombre puede sintetizarse a partir de otros compuestos. Pertenece al grupo de los llamados aminoácidos ácidos, o con carga negativa a pH fisiológico, debido a que presenta un segundo grupo carboxilo en su cadena secundaria. Sus pK son 1,9; 3,1; 10,5 para sus grupos alfa-carboxilo, delta-carboxilo y alfa-amino .

· Glicina: es uno de los aminoácidos que forman las proteínasde los seres vivos. En el código genético está codificada como GGT, GGC, GGA o GGG.

Es el aminoácido más pequeño y el único no quiral de los 20 aminoácidos presentes en la célula. Su fórmula química es NH2CH2COOH y su masa es 75,07. La glicina es un aminoácido no esencial. Otro nombre (antiguo) de la glicina es glicocola.

La glicina actúa como neurotransmisorinhibidor en el sistema nervioso central. Fue propuesta como neurotransmisor en 1965.


· Ácido Clorhídrico: puede producir gastritis, quemaduras, irritación en la piel y tracto respiratorio; es corrosivo, puede producir ceguera.





  • Hidróxido de Sodio:también conocido como sosa cáustica o soda cáustica, es un hidróxidocáustico usado en la industria (principalmente como una base química) en la fabricación de papel, tejidos, y detergentes.

A temperatura ambiente, el hidróxido de sodio es un sólido blanco cristalino sin olor que absorbe humedad del aire (higroscópico). Es una sustancia manufacturada. Cuando se disuelve en agua o se neutraliza con un ácido libera una gran cantidad de calor que puede ser suficiente como para encender materiales combustibles. El hidróxido de sodio es muy corrosivo. Generalmente se usa en forma sólida o como una solución de 50%.

Por ingestión, puede causar daños graves y permanentes al sistema gastrointestinal. Por inhalación, causa irritación con pequeñas exposiciones, puede ser dañino o mortal en altas dosis. En contacto con la piel, peligroso. Los síntomas van desde irritaciones leves hasta úlceras graves. En contacto con los ojos, peligroso;puede causar quemaduras, daños a la córnea o conjuntiva.




· Leche de vaca, de cajita: es una secreción nutritivade color blanquecino opaco producida por las glándulas mamarias de las hembras (a veces también por los machos) de los mamíferos.



· Etanol: conocido como alcohol etílico, es un alcoholque se presenta en condiciones normales de presióny temperaturacomo un líquido incoloro e inflamable con un punto de ebullición de 78 °C.

Mezclable con aguaen cualquier proporción; a la concentración de 95% en peso se forma una mezcla azeotrópica.

El etanol puede afectar al sistema nervioso central, provocando estados de euforia, desinhibición, mareos, somnolencia, confusión, ilusiones (como ver doble o que todo se mueve de forma espontánea). Al mismo tiempo, baja los reflejos. Con concentraciones más altas ralentiza los movimientos, impide la coordinación correcta de los miembros, pérdida temporal de la visión, etc.






· Éter: Es un líquido inflamable, muy volátil y que puede formar peróxidos explosivos, por lo que existe un alto riesgos de fuego y explosión. Los vapores pueden llegar a un punto de ignición, prenderse y transportar el fuego al lugar que los originó, además pueden explotar si se prenden en un área cerrada. Además, debido a que su punto de autoignición es bajo y puede generar electricidad estática, debido a que no es conductor, el riesgo de incendio o explosión aumenta.



Procedimiento



Parte AàTitulación de aminoácidos:





Parte A.1àPunto isoeléctrico y solubilidad:







Parte BàDeterminación del punto isoeléctrico de la caseína de la leche:




Cuestionario:

1.   ¿Por qué no se alcanza el pH 1 con HCl 0.1M en las solucio­nes en las que se prepararon los aa.?
2.   Compare los puntos isoeléctricos de la glicina y los péptidos glicil-glicina y glicil-glicil-glicina. ¿Qué concluye sobre estos resultados?

3.   Por qué las moléculas con grupos ionizables se hacen menos solubles en el punto isoeléctrico.

4.   En la precipitación de la caseína qué pasaría si se añade muy rápido el ácido y se alcanza un pH más bajo que 4.8. Qué se debe hacer en este caso?

5.    ¿Por qué es necesario lavar la caseína precipitada con alcohol (Etanol 95%) y éter.
  

1 comentario:

  1. MUY BIEN FELICIDADES......
    PARA HOY TENEMOS LA ESTUDIO DE INHIBICION DE LA PAPAA

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